(一)细菌学检查

　　嗜血杆菌属革兰氏阴性杆菌，培养条件显示多形性特征，易染性，此菌无芽孢，无运动。

　　1.镜检：从软下疳开放性溃疡取材涂片标本染色，杜克雷嗜血菌易检出，未破溃病灶从脓肿或横痃中穿刺，取其穿刺液涂片标本染色也易检出，更为典型，用美蓝染色或革兰氏染色等镜检用10×100倍油浸观察。

　　2.培养检查：软下疳菌分离培养较为困难，故在采取标本时应注意取软下疳溃疡边缘下贮留脓汁或穿刺横痃抽吸的脓汁，或再用生理盐水充分洗涤溃疡底面后，再用生理盐水湿棉签涂抹标本送培养。国际上软下疳的标准培养基一种是GCHGS(Hammond gonococcal media)，由淋球菌琼脂培养基加牛血红蛋白、胎牛血清、万古霉素及纤维素、氨基酸等组成;另外一种是MHHb(Muller-Hinton琼脂，由Muller-Hinton 琼脂、马血、万古霉素及其他培养成份组成)，上述两种培养基可以同时应用，以提高阳性率。菌落常于接种后24-48小时形成。色灰黄而透亮，直径约为1-2mm。从菌落处取材作革兰染色阴性，为成双的短杆菌，成链状排列。同时应作生化反应以鉴定之。主要有：氧化酶试验弱阳性，过氧化酶试验阴性，非卟啉试验阴性，硝酸盐还原试验阳性，硷性磷酸酶试验阳性。 杜克雷嗜血杆菌的培养不仅有助于诊断，而且可确定分离的细菌对抗生素的敏感性，目前已分离出耐抗生素的杜克雷嗜血杆菌。

　　(二)血清学检测

　　感染杆克雷嗜血杆菌能产生抗体，通过血清学检查，不论是补体结合，凝集反应以及荧光抗体间接法等均可证实，但尚未推广，目前认为IgM抗体敏感性为74%，IgG抗体敏感性为94%，其特异性分别为84%和64%。这种方法准确率有待提高。

　　(三)PCR检测杜克雷嗜血杆菌  此方法检测细菌DNA，科研上应用多，临床诊断未有可用试剂。

　　(四)组织病理改变

　　病理表现为中央为溃疡，溃疡边缘表皮增生，溃疡下方可见三个炎症带，垂直排列，分别为：溃疡基底层：多形核白细胞为主，混有红细胞，纤维素及坏死组织。中层有许多 新生的血管，组织水肿明显，有嗜中性白细胞、淋巴细胞及组织细胞浸润，可见较多的纤维母细胞。深层为淋巴细胞、浆细胞弥漫性浸润，血管周围明显。用 Giemsa及Gram染色，有时可在浅层或深层中查见杜克雷嗜血杆菌。

　　疾病诊断

　　根据发病前的性接触史，尤其是不洁性交史，典型的临床表现和经过，较短的潜伏期后发生软而扁的丘疹、脓疱、溃疡，单侧性的化脓性淋巴结炎，直接镜检和培养检出杜克雷嗜血杆菌，PCR检测杜克雷嗜血杆菌DNA，即可作出诊断。

　　诊断依据：①阴部溃疡，一个或多个;②暗视野显微镜检查，梅毒螺旋体阴性;③梅毒血清试验阴性;④病损潜行性边缘取材涂片，用瑞氏染色未发现朵诺凡小体(肉芽肿荚膜杆菌)，而用革兰氏染色可找到短小的革兰氏阴性杆菌。

　　鉴别诊断

　　需要与梅毒硬下疳、生殖器疱疹、性病性淋巴肉芽肿、固定性药疹、白塞氏病等鉴别。建议同时检测梅毒、艾滋病、肝炎等传染病。

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